《中国病毒病杂志》  2011年02期 99-105   出版日期:2011-04-01   ISSN:2095-0136   CN:11-5969/R
 一组分离自男男性行为人群HIV-1毒株的近似全长序列分析


 

近年来,我国男男性行为人群(men who have sex with men,MSM)中HIV的感染率一直呈上升趋势,且流行病毒的亚型渐由单一亚型向多种亚型过渡。如何控制HIV-1在男男性行为人群中的蔓延和流行仍然是一个棘手的问题。本研究对男男性行为感染者体内分离出的5株病毒进行全长扩增测序,并对其序列的重要特征进行相关分析,以期为艾滋病防治和疫苗研究提供理论依据。

1 对象

1.1 研究对象 5例全血样品获自北京男性性行为感染HIV的患者,所有感染者在采血前均签署了知情同意书。每位感染者采集静脉血15 ml, 采用Ficoll法分离PBMC(peripheral blood mononulear cells)

1.2 方法

1.2.1 病毒的分离和培养 将感染者外周血淋巴细胞与健康人淋巴细胞共培养,每48 h测量一次培养上清中的p24抗原含量。若为阳性即冻存培养上清于-80℃待用。

1.2.2 病毒的全基因组扩增 利用Qiagen试剂盒提取上清中病毒RNA。病毒5’half molecule 基因组的扩增,采用1.U5.B1F 和 07Rev8为第一轮扩增引物,Upper1A和Rev11为第二轮扩增引物进行扩增。病3’ half molecule 基因组的扩增,07For7 和 2.R3.B6R为外侧引物,VIF 1和Low2c为内侧引物进行PCR扩增[1]

1.2.3 常用材料 Plantinum Taq High Fidelity Kit (Invitrogen), 逆转录酶SuperscriptIII (Invitrogen), RNAseOUT (Invitrogen)