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悬浮驯化 Vero细胞制备及其在大流行流感病毒株培养的初步应用(PDF)

《中国病毒病杂志》[ISSN:2095-0136/CN:11-5969/R]

期数:
2021年第3期
页码:
182-186
栏目:
论 著
出版日期:
2021-08-01

文章信息/Info

Title:
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作者:
刘鹏钏鸿云阮朝列
北京协和医学院 中国医学科学院 医学生物学研究所,云南 昆明 650118
Author(s):
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关键词:
Vero细胞悬浮培养流感病毒大流行病毒培养
Keywords:
VeroSuspensioncultureInfluenzavirusPandemic
分类号:
R373
DOI:
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文献标识码:
摘要:
目的 悬浮驯化培养 Vero细胞 (Verosimiankidneyepithelial,Vero),并用于流感病毒 H5N1及 H7N9Vero细胞高 产 重 配 株 的 制 备。方 法 使 用 自 配 的 Vero 细 胞 悬 浮 培 养 基 (Verocellssuspension media1,VSM1)在搅拌瓶中驯化贴壁 Vero细胞适应悬浮培养,获得可悬浮培养的 Vero细胞。使用工作 体积5ml的50ml离心管为悬浮培养单元,同时设置相同工作体积的单层贴壁 Vero细胞作为对照,以血 凝滴度评 价 流 感 病 毒 在 悬 浮 Vero 细 胞 上 的 复 制 能 力。 结 果 本 实 验 获 得 的 悬 浮 Vero 细 胞 在 1.78×105细胞/ml的接种密度培养72h后,细胞密度可达7.45×105 细胞/ml。细胞倍增时间缩短在48h 内,比生长速率 (μ)在驯化60~80d后,维持在 (0.016±0.007)h-1。悬浮 Vero细胞分别接种 H5N1 和 H7N9后,平均血凝滴度分别为587HAU/50μl和224HAU/50μl,均高于贴壁对照组。结论 VSM1 可以成功驯化 Vero细胞摆脱贴壁依赖,获得适应悬浮培养的 Vero细胞。初步探索悬浮 Vero细胞生产大 流行流感病毒株的能力,可为发酵工艺规模生产大流行流感病毒株疫苗做铺垫。
Abstract:
TostudyVerocellsinsuspensioncultureandtheproductionofhighyieldingrecombina tionstrainsofpandemicinfluenzavirusH5N1andH7N9. Verocellswereadaptedtogrowinsus pensioninVSM1media,aselfdesignedsuspensionmediumforVerocells,andtheprocessofadheredVero cellstosinglecellsuspensioncultureinstirredflaskwasrecordedandobtainedthedomesticatedVerocellsul timately.Furthermore,a50mlcentrifugetubewithaworkingvolumeof5mlwasusedasasuspensionculture unitwhileadherentVerocellswiththesameworkingvolumeasthecontrol.TheabilityofthesuspendedVero cellstoproducepandemicinfluenzaviruswasevaluatedbyhemagglutinationtest. Themaximalcell densityofthesuspended Verocellsreached 7.45×105 cells/ml72 h aftertheinoculation density of 1.78×105cells/ml. Thecelldoublingtimewasreducedwithin48h,andthespecificgrowthratewasmain tainedat(0.016±0.007)h-1from60to80daysafteradaptation.Themeanvaluesofthehighesthemaggluti nationtitersofH5N1andH7N9inoculatedwithsuspendedVerowere587and224HAU/50μl,respectively, whichwerehigherthanthatoftheadherentcontrolgroup. VSM1cansuccessfullydomesticateVerocellstogetridofanchoragedependenceandobtainVerocellssuitableforsuspensionculture.Thepoten tialofsuspensionVerocellsfortheproductionofpandemicinfluenzavirusisevaluated.

参考文献/References

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备注/Memo

备注/Memo:
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更新日期/Last Update: 2021-08-06