|本期目录/Table of Contents|

塔城病毒1重组核蛋白的原核表达和纯化(PDF)

《中国病毒病杂志》[ISSN:2095-0136/CN:11-5969/R]

期数:
2021年第2期
页码:
128-134
栏目:
论 著
出版日期:
2021-04-20

文章信息/Info

Title:
-
作者:
李赞杜珊王伟佳
中山大学,广东 广州 510006
Author(s):
-
关键词:
布尼亚病毒塔城病毒1核蛋白蛋白纯化 中图分类号:R373.9 文献标识码:A 文章编号
Keywords:
BunyavirusTachengtickvirus1NucleoproteinProteinpurification
分类号:
R373.9
DOI:
-
文献标识码:
A
摘要:
目的 通过原核表达系统表达可溶性塔城病毒1 (Tachengtickvirus1,TcTV1)重组融合核蛋白 (nucleoprotein,NP)并纯化获得纯度高和均一度好的目的蛋白。方法 利用聚合酶链式反应 (polymerase chainreaction,PCR)从经密码子优化的重组质粒中扩增 TcTV1核蛋白的编码基因,构建带有小分子泛素 样修饰蛋白 (smallubiquitinlikemodifier,SUMO)融合标签的重组质粒 pET21aTcTV1NP,转化入表 达菌株 BL21 (DE3),异丙基βD硫代半乳糖苷 (isopropylbetaDthiogalactopyranoside,IPTG)诱导高表 达量菌株。采用镍离子金属鳌合亲和层析介质 (NiNTA)亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析提纯 目的蛋白。结果 经 PCR扩增的目的基因 TcTV1核蛋白和质粒载体pET21a进行重组质粒构建,电泳结 果显示,在约6000bp处可见条带,与重组质粒 pET21aTcTV1NP大小相一致;重组质粒转入大肠埃 希菌 BL21 (DE3),在16℃,0.2mmol/LIPTG诱导下表达出大量可溶性蛋白,收集并重悬菌体后,经低 温高压和超声破碎后,细菌上清液经 NiNTA 亲和层析纯化,在250mmol/L咪唑洗脱液中获得目的蛋白; 去除融合标签 后,十 二 烷 基 硫 酸 钠 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 (SDSpolyacrylamidegelelectrophoresis,SDS PAGE)结果显示在相对分子质量为50000附近处出现明显条带,与目的蛋白相对分子质量为48800相一 致;目的蛋白通过阳离子交换层析,得到1个蛋白洗脱峰;经凝胶过滤层析再次纯化,收集相应的蛋白洗 脱峰,经SDSPAGE结果显示目的蛋白大小正确,纯度较高。结论 TcTV1重组融合核蛋白在大肠埃希 菌内以可溶性形式成功表达,为进一步研究 TcTV1核蛋白的作用机制和相应血清学检测方法的开发提供 了重要的基础。
Abstract:
-

参考文献/References

-

备注/Memo

备注/Memo:
-
更新日期/Last Update: 1900-01-01